Fyrirhuguð notkun
Það er notað til að greina apabóluveiru í sermi úr mönnum eða sýnum úr sárum með því að nota rauntíma PCR kerfi.
Prófregla
Þessi vara er Taqman® rauntíma PCR prófunarkerfi sem byggir á flúrljómandi rannsaka.Sérstakir grunnar og rannsakar eru hannaðir til að greina F3L gen af Monkeypox Virus.Innra eftirlit sem miðar að hinu varðveitta geni úr mönnum fylgist með sýnatöku, meðhöndlun sýna og rauntíma PCR ferli til að forðast rangar neikvæðar niðurstöður.Settið er fullkomlega forblandað frostþurrkað kerfi, sem inniheldur efni sem þarf til að greina Monkeypox veira: kjarnsýrumögnunarensím, UDG ensím, hvarfstuðpúði, sértækur grunnur og rannsaka.
Íhlutir | Pakki | Hráefni |
Monkeypox vírusFrostþurrkað Premix | 8 ræmur PCR slöngur× 6 pokar | Grunnur, rannsaka, dNTP/dUTP blanda, Mg2+, Taq DNA pólýmerasi, UDG ensím |
MPV jákvæð stjórn | 400 μL×1 rör | DNA raðir sem innihalda Target gen |
MPV neikvæð stjórn | 400 μL×1 rör | DNA raðir sem innihalda genahluta úr mönnum |
Uppleysandi lausn | 1 ml×1 rör | Stöðugleiki |
Samræmisvottorð | 1 stykki | / |
1. SýnishornSafn:Safna skal sýni í sæfð glös í samræmi við það
með stöðluðum tækniforskriftum.
2. Undirbúningur hvarfefna (undirbúningssvæði fyrir hvarfefni)
Taktu íhlutina úr settinu, taktu þá við stofuhita til að nota í biðstöðu.
3. Sýnavinnsla (sýnavinnslusvæði)
3.1 Kjarnsýruútdráttur
Mælt er með því að taka 200μL vökvasýni, jákvæða stjórn og neikvæða stjórn fyrir kjarnsýruútdrátt, í samræmi við samsvarandi kröfur og verklagsreglur um veiru DNA útdráttarsett.
3.2 Frostþurrkað duft uppleyst og sniðmát bætt við
Undirbúið Monkeypox Virus frostþurrkað forblöndu í samræmi við fjölda sýna.Eitt sýni þarf eitt PCR glas sem inniheldur frostþurrkað forblöndu duft.Meðhöndla skal neikvæða stjórn og jákvæða stjórn sem tvö sýni.
(1) Bætið 15μL upplausnarlausn í hvert PCR glös sem inniheldur frostþurrkaða forblöndu, bætið síðan 5μL útdregnum sýnum/neikvæðum samanburði/Jákvæðri samanburði í hvert PCR glös.
(2) Lokaðu PCR glösunum vel, flettu PCR glösunum með höndunum þar til frostþurrkað duft er alveg uppleyst og blandað, safnaðu vökvanum í botn PCR glösanna með tafarlausri lághraða skilvindu.
(3) Ef notað er algengt rauntíma PCR tæki til uppgötvunar, flytjið þá PCR rör beint á mögnunarsvæðið;ef þú notar BTK-8 til uppgötvunar, þá þarftu að framkvæma eftirfarandi aðgerðir: flytja 10 μL vökva úr PCR rörinu í hvarfflísarholuna á BTK-8.Eitt PCR rör samsvarar einum brunni á flísinni.Meðan á pípettunni stendur skal ganga úr skugga um að pípettan sé 90 gráður lóðrétt.Staðsetja skal úðavarnarpípettuoddana í miðju holunnar með hóflegum krafti og hætta að ýta á pípettuna þegar hún nær fyrsta gír (til að forðast loftbólur).Eftir að brunnarnir eru fylltir, takið út hvarfflöguhimnu til að hylja alla brunna og flísinn er síðan fluttur á mögnunargreiningarsvæðið.
4. PCR mögnun (uppgötvunarsvæði)
4.1 Settu PCR glösin/hvarfflísinn í hvarftankinn og stilltu nöfn hvers hvarfhols í samsvarandi röð.
4.2 Stillingar greiningarflúrljómunar: (1) Monkeypox veira (FAM);(2) Innra eftirlit (CY5).
4.3 Keyrðu eftirfarandi hjólreiðarsamskiptareglur
Bókun ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
Skref | Hitastig | Tími | Hringrásir | |
1 | Pre-denaturation | 95 ℃ | 2 mín | 1 |
2 | Denaturation | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
Glæðing, framlenging, flúrljómun | 60 ℃ | 30 sek |
Bókun BTK-8:
Skref | Hitastig | Tími | Hringrásir | |
1 | Pre-denaturation | 95 ℃ | 2 mín | 1 |
2 | Denaturation | 95 ℃ | 5 sek | 45 |
Glæðing, framlenging, flúrljómun | 60 ℃ | 14 sek |
5. Niðurstöðugreining (vinsamlegast sjáðu notendahandbók tækisins)
Eftir viðbrögðin verða niðurstöðurnar vistaðar sjálfkrafa.Smelltu á „Analyze“ til að greina, og tækið mun sjálfkrafa túlka Ct gildi hvers sýnis í niðurstöðudálknum.Neikvæð og jákvæð eftirlitsniðurstöður skulu vera í samræmi við eftirfarandi „6. Gæðaeftirlit“.
6. Gæðaeftirlit
6.1 Neikvæð stjórn: Enginn Ct eða Ct>40 í FAM rás, Ct≤40 í CY5 rás með eðlilegri mögnunarferil.
6.2 Jákvæð stjórn: Ct≤35 í FAM rás með eðlilegri mögnunarferil, Ct≤40 í CY5 rás með eðlilegri mögnunarferil.
6.3 Niðurstaðan er gild ef öll ofangreind skilyrði eru uppfyllt.Annars er niðurstaðan ógild.
Niðurstöðutúlkun
Eftirfarandi niðurstöður eru mögulegar:
Ct gildi FAM rásar | Ct gildi CY5 rásar | Túlkun | |
1# | Ekkert Ct eða Ct>40 | ≤40 | Monkeypox veira neikvæð |
2# | ≤40 | Einhverjar niðurstöður | Monkeypox veira jákvæð |
3# | 40-45 | ≤40 | Prófaðu aftur;ef það er enn 40~45, tilkynntu sem 1# |
4# | Ekkert Ct eða Ct>40 | Ekkert Ct eða Ct>40 | Ógilt |
ATH: Ef ógild niðurstaða kemur fram þarf að safna sýninu og prófa það aftur.
vöru Nafn | Köttur.Nei | Stærð | Sýnishorn | Geymsluþol | Trans.& Sto.Temp. |
Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 próf/sett | Serum/sjónablæðing | 12 mánuðir | -25~-15℃ |